Protein-Free Cryopreservation Medium
无血清非程序细胞冻存液(无蛋白)
产品组成 | YH0027 |
无血清非程序细胞冻存液(无蛋白) | 100 ml |
说明书 | 1 份 |
产品简介
细胞冻存液作为冻存细胞时的液体环境，给细胞提供着营养和保护作用，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，能使细胞内水分在冻结前透出细胞，防止或减少冰晶对细胞的损伤，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，因其中的血清成分复杂、批次差异大等缺点，其应用具有局限性，且需要采用程序性降温的冻存方法（4℃→-20℃→-80℃→液氮），费时费力。
云贺无血清非程序细胞冻存液(无蛋白)化学成分明确，含有糖类、氨基酸等营养物质以及DMSO等多种保护剂组合，大大降低了在冻存过程中冰晶对于细胞的损伤，有效提高细胞复苏率和活力；不含血清和蛋白成分，无任何动物源组分，减少外源因子和污染源，更加安全、稳定；同时可省去繁琐费时的程序性降温过程，可直接重悬细胞后置于-80℃保存，或次日转移到液氮中。
云贺无血清非程序细胞冻存液(无蛋白)高效、安全、稳定、操作便捷，与传统细胞冻存液相比具有明显优势（表1），冻存细胞复苏后的存活率也有明显提高（表2），推荐用于常规哺乳动物细胞的冻存，也非常适合无血清培养的细胞冻存。按照一般情况冻存1管细胞使用1ml冻存液计算，本产品可以用于大约100管细胞的冻存。
表1：传统细胞冻存液和云贺无血清非程序细胞冻存液(无蛋白)的特点比较
成分 | 基础培养基+血清+DMSO，血清成分复杂 | 化学组成明确，含有营养成分和保护剂，不含血清或其他蛋白成分 |
冻存液配制 | 现用现配 | 即用型，无需配制，4℃保存，即取即用 |
冻存操作方法 | 较复杂，需要程序性降温，操作时间长 | 简单快捷，直接放入-80℃即可，省时省力 |
复苏存活率 | 一般（微量冻存时细胞存活率低） | 高（微量冻存时细胞存活率也高） |
细胞保存设备 | 液氮 | 液氮或者-80℃低温冰箱 |
安全性 | 有动物来源病毒、霉菌和支原体等污染风险 | 无动物来源病毒、霉菌和支原体等污染风险 |
冻存细胞种类 | 适合含血清细胞冻存 | 适合各类细胞冻存，尤其是无血清驯化细胞，节省再驯化步骤 |
批次差异 | 批次差异大 | 批次差异极小 |
整板冻存 | 不可行 | 可行，且方便快捷 |
表2：云贺无血清非程序细胞冻存液(无蛋白)与传统细胞冻存液（70%基础培养基+20%FBS+10%DMSO）冻存细胞复苏后存活率的比较（列举部分细胞）
细胞名称 | 种属-来源 | 传统冻存液存活率 | 无血清非程序细胞冻存液存活率 |
NIH/3T3 | 小鼠胚胎成纤维细胞 | 91.17% | 95.60% ↑ |
Hela | 人宫颈癌细胞 | 96.77% | 98.43% ↑ |
L-929 | 小鼠成纤维细胞 | 92.07% | 96.13% ↑ |
PC-3 | 人前列腺癌细胞 | 80.33% | 95.27% ↑ |
Caco-2 | 人结直肠腺癌细胞 | 86.47% | 93.53% ↑ |
293 | 人胚肾细胞 | 92.60% | 96.43% ↑ |
MDA-MB-231 | 人乳腺癌细胞 | 80.73% | 90.80% ↑ |
Jurkat | 人急性T淋巴细胞白血病细胞 | 84.03% | 92.20% ↑ |
THP-1 | 人单核细胞 | 96.63% | 97.37% ↑ |
MGC80-3 | 人胃癌细胞 | 95.97% | 97.13% ↑ |
使用方法：
一、细胞冻存：
【冻存前，请确保细胞处于对数生长期】
1. 贴壁细胞制备细胞悬液：（悬浮细胞请忽略此步骤）
(1) 将旧培养基吸除，用PBS清洗两遍。
(2) 在培养瓶中加入少许胰酶，以能覆满瓶底为限。将培养瓶平置于培养箱中消化约1~2分钟，期间在显微镜下观察，一旦发现细胞间隙增大、细胞变圆、比较松动后，立即终止消化（个别难消化细胞需要延长消化时间，但要避免消化过度）。
(3) 加入适量温浴好的完全培养基终止消化，轻轻吹打均匀细胞。
2. 贴壁细胞和悬浮细胞的冻存：
(1) 取少量细胞悬液细胞计数，算出细胞总数和所需细胞冻存液的量。细胞的冻存密度以1×106~1×107 cells/ml为宜。
(2) 将所需量的细胞悬液转移至适当离心管中，200~500×g，离心3-5分钟，弃上清收集细胞。（离心速度和时间取决于细胞类型）
(3) 向细胞沉淀中加入适量无血清非程序细胞冻存液，用移液器轻轻吹打以重悬细胞，分装于无菌细胞冻存管中，严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。
(4) 直接置于-80℃冰箱中储存，细胞可至少保存一年；或者-80℃过夜后，次日将细胞投入液氮中长期储存。
（二）细胞复苏：
1. 自液氮罐或-80℃冰箱中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即放入37℃水浴中快速解冻（避免冰晶重新结晶而造成细胞死亡），轻摇冷冻管使其在1~2分钟内全部融化，以75%酒精擦拭冻存管外部，移入无菌操作台内。
2. 将解冻的细胞悬液移至15ml无菌离心管中，再加入5~10ml预热好的完全培养基，轻轻混合均匀，200~500×g，离心3-5分钟，弃上清收集细胞。（离心速度和时间取决于细胞类型）
3. 加入预热好的完全培养基，混合均匀，转移到细胞培养皿或培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
保存条件：4℃保存，24个月有效。
注意事项：
1. 使用时，可直接将冻存液从4℃取出使用。如长时间放置出现少量沉淀，为成分的正常析出，请于37℃水浴温热片刻使成分完全溶解，然后再预冷使用。
2. 冻存过程中，在将冻存液加入到细胞之后，请尽量在冰袋附近操作，因为低温可以避免保护剂对细胞造成损伤。
3. 请保证细胞冻存管完全密封，避免在复苏过程中冻存管炸裂。
4. 理论上，本产品适用于各种哺乳动物细胞的冻存 ，但因细胞系种类繁多，无法逐一验证，因此，若冻存干细胞、免疫细胞或者珍贵的细胞，建议您在第一次使用时进行预实验，即在冻存24h后，复苏一支，确认细胞正常，再进行后续的冻存工作，避免意外。
5. 本产品为无菌包装，无需过滤，请注意无菌取用。
6. 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
