产品编号：
YH0034-1 规格：5×1 mL
YH0034-2 规格：15×1 mL
YH0034-3 规格：50×1 mL
产品内容：
2×Taq Master Mix (Dye Plus) | 5×1 mL | 15×1 mL | 50×1 mL |
说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
产品简介：
本产品包含Taq DNAPolymerase、dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。扩增体系中加入的保护剂使得2 ×Taq MasterMix (Dye Plus) 反复冻融后仍可保持稳定活性。本品含有电泳缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。PCR产物的3’端带A，可直接克隆至T载体。
质量控制
SDS-PAGE检测条带单一，经检测无外源核酸酶活性，PCR检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
运输与保存方法
-20℃保存。2 ~8℃运输。
有效期2年。
若短期内使用频次高溶解后可于4℃保存，使用前请颠倒混匀。尽量避免多次反复冻融。
实验流程
PCR反应体系
组分 | 体积 |
ddH2O | to 50 μL |
2 × Master Mix (Dye Plus) | 25 μL |
模板DNA | optional |
引物1(10 μM) | 2 μL |
引物2(10 μM) | 2 μL |
【注】：
不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类 | 扩增片段 |
基因组DNA | 100 ng-1μg |
质粒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL（不超过反应体系的1/10） |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 30 sec-3 min | 1 |
变性 | 94℃ | 20-30 sec | 30-35 |
退火 | 50-60℃ | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 1-2kb /min |
终延伸 | 72℃ | 5-10 min | 1 |
PCR扩增程序
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min。
2）退火温度和时间：推荐使用50-60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
注意事项：
操作注意事项
1.由于Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系请在冰上进行配制，之后再置于PCR仪上进行反应。这样可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增，有助于得到高特异性的扩增结果。
2.电泳时色素Marker位置：反应液5μL，1%Agarose电泳时，蓝色色素在3-5kb附近，黄色色素在50bp以下位置。
引物设计要点：
1. 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2. 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3. 引物3’端应避免出现发夹结构；
4. 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳，Tm值调整至55-65℃为佳(引物Tm值推荐使用Primer Premier 5进行计算)；
5. 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6. 引物的GC含量控制在40-60%之间；
7. 引物A、G、C、T整体分布要尽量均匀，避免使用GC或者AT含量高的区域；
8. 避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列，两条引物的3’端避免3个碱基以上的互补序列；
9. 引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性，以避免非特异性扩增产生。
