NADPH(还原型辅酶Ⅱ)生成系统
(100T)
产品编号:YM0036
一、产品概述:
该系统可以为CYP450等氧化还原酶的体外代谢评价实验提供NADPH。
二、原理:
该生成系统中Reagent A和Reagent B在体外孵育体系中可以产生活泼氢,通过加入Reagent C后可以迅速在体系内产生NADPH,进而辅助体系中的氧化还原酶例如CYP450酶催化相关药物或者探针的代谢反应。此系统中各组分稳定性较好,避免了单独使用NADPH的不稳定性。
三、产品组分:
组分 | YM0036(100T) |
Reagent A | 2 mL 反应Buffer溶解后使用 |
Reagent B | 2 mL 溶液 |
Reagent C | 2 mL 反应Buffer溶解后使用 |
四、保存条件:
组分 | YM0036(100T) |
Reagent A | -20 oC保存6个月 |
Reagent B | -20 oC保存6个月(分装避免反复冻融) |
Reagent C | -20 oC保存6个月 |
五、 实验步骤:
此NADPH生成系统适用于200μL的体外药物代谢孵育反应:(具体实验操作可以参考如下操作进行个性化调整)
反应Buffer: K2HPO4-KH2PO4 缓冲溶液(100 mM, pH = 7.4)
将除Reagent C外的其他成分(反应Buffer,待测酶源,药物,MgCl2,20μL Reagent A,20μL Reagent B等)混合均匀后,于37℃预孵3 min,随后加入20μL Reagent C起始反应(终体积为200 μL)。
反应终止后样品用于相关质谱、HPLC、荧光等检测;